Иммунные нарушения в организме супругов способствуют многочисленным неудачам при экстракорпоральном оплодотворении. К одной из самых распространённых категорий иммунных нарушений относится идентичность мужа и жены по системе HLA-антигенов. Анализы на HLA-совместимость супругов в последнее время всё чаще рекомендуют тем парам, у которых уже были неудачные попытки ЭКО. HLA-типирование мужчины и женщины, которые решили прибегнуть к ЭКО, как к последней возможности обзавестись потомством, даёт возможность определить степень «несовместимости». Как правило, HLA-типирование назначают с целью уточнения причины бесплодия, а также для определения методов дальнейшего лечения.
HLA- совместимость
HLA–антигены присутствуют на поверхности почти всех клеток организма, но максимально полно данные молекулы представлены на лейкоцитах, благодаря чему и получили своё название. У каждого человека имеется свой персональный набор HLA-антигенов. Благодаря их молекулам, организм обладает способностью различать свои клетки от чужеродных, вырабатывая при необходимости специфические антитела. Они способствуют уничтожению чужих агентов, в роли которых могут выступать вирусы, раковые клетки, бактерии.
Наличие HLA-антигенов у каждого человека определяется точно таким же персональным набором HLA-генов. Ребёнок получает от своих родителей абсолютно индивидуальное сочетание HLA-генов, сходное по своей уникальности с отпечатками пальцев. Существует 2 класса HLA-антигенов: антигены локусов A, B и C и антигены локусов DR, DP и DQ. HLA-антигены первого класса встречаются на поверхности любых клеток, HLA-антигены второго класса присутствуют только на поверхности тех клеток, которые принимают участие в иммунологических реакциях. К ним относятся активированные Т-лимфоциты, В-лимфоциты, моноциты, дендритные клетки и макрофаги.
HLA- совместимость и беременность
Наследуя антигены тканевой совместимости, плод получает от матери и отца по одному гену каждого локуса. Таким образом, половина антигенов наследуется от отца, из-за чего ребёнок, которого вынашивает женщина, является для неё наполовину чужеродным. При нормальном стечении обстоятельств, подобный фактор относится к разряду обычных физиологических явлений. Запуск иммунологических реакций, обусловленный этим процессом, обеспечивает сохранение беременности. Формирование клона иммунных клеток способствует выработке особых блокирующих антител.
В организме не беременной женщины иммунные клетки, выполняющие роль разведчиков, находят на поверхности любых клеток белки главного комплекса HLA-антигенов. Обнаруживая «чужаков», например, раковые клетки или занесённые извне вирусы, иммунная система отдаёт приказ на уничтожение. Если бы при возникновении беременности этот процесс происходил в таком же порядке, то у плода не было бы шанса выжить, поскольку для организма матери он является «чужаком».
Но подобного не происходит по той причине, что во время беременности иммунная система матери не различает клеточные структуры плода. В этот период В-лимфоциты эндометрия способствуют выработке защитных антител, которые направлены против HLA-антигенов, полученных ребёнком в наследство от отца. Данные антитела обеспечивают блокировку HLA-антигенов отца, защищая их от материнских иммунных клеток, которые выступают в роли разведчиков, благодаря чему последние не в состоянии осуществить передачу информации клеткам-киллерам. По этой причине иммунная реакция организма матери не активируется в ответ на появление изначально «чужих» клеток, и эмбрион благополучно приживается.
При этом огромное значение имеет отсутствие идентичности HLA-антигенов супругов, поскольку лишь в этом случае механизм запуска блокирующих антител, способствующих сохранению беременности. Если же HLA-антигены родителей являются сходными, то антитела, главной задачей которых является блокировка отцовских HLA-антигенов, не вырабатываются. В результате клетки-разведчики воспринимают плод в качестве инородного тела, включая против него систему уничтожения. Итогом этого процесса становится выкидыш. Чем больше антигенов HLA совпадает у родителей, тем меньше шансов выносить беременность.
HLA-типирование
Наличие HLA-идентичности очень часто становится причиной женского бесплодия, либо привычного невынашивания. Именно поэтому пациенткам, избравшим в качестве метода лечения бесплодия экстракорпоральное оплодотворение, врачи часто рекомендуют пройти вместе с мужьями HLA-типирование. Показаниями к HLA-типированию являются не только бесплодие, но и наличие в анамнезе выкидышей или неудачных попыток ЭКО.
HLA-типирование подразумевает анализ полиморфизма HLA и осуществляется он, как правило, двумя способами. Первый из них, классический, базируется на микролимфоцитотоксическом тесте. Применение молекулярно-генетического метода подразумевает проведение полимеразной цепной реакции.
Классическое, или серологическое HLA-типирование, осуществляется на выделенных клеточных популяциях. Поскольку антигены основного комплекса гистосовместимости большей частью несут на себе лимфоциты, для определения антигенов l класса используется суспензия Т-лимфоцитов, для антигенов II класса - суспензия В-лимфоцитов. Для того, чтобы выделить из цельной крови требуемые клеточные популяции, применяются два способа – иммуномагнитная сепарация или центрифугирование. Как правило, в основном используется первый метод, поскольку второй чаще становится источником ложноположительных данных по причине гибели части клеток.
Для проведения лимфоцитотоксического теста HLA-типирования используется специальная сыворотка, в состав которой входят антитела к различным видам антигенов обоих классов. В процессе проведения серологического теста, изучая, какой вид сыворотки вступает в реакцию с лимфоцитами, удаётся выяснить HLA-тип. В случае возникновения реакции между сывороткой и клеткой, на поверхности последней формируется комплекс антиген-антитело. Если в сыворотку влить раствор, в состав которого входит комплемент, разрушение и гибель клетки неизбежны.
Для оценки серологического метода HLA-типирования используется флуоресцентная микроскопия, причём красная флуоресценция означает наличие позитивной реакции, а зелёная – негативной. При определении результата этого метода учитывается специфичность сывороток, проявивших реакцию, а также определённых групп антигенов, вступивших в перекрёстную реакцию. Кроме того, принимается во внимание также и интенсивность цитотоксической реакции.
У этого метода HLA-типирования существуют определённые недостатки: - низкая экспрессия HLA-антигенов или слабое сродство антител; - существование перекрестных реакций; - отсутствие белковых продуктов у некоторых HLA-генов.
Применение молекулярно-генетических способов HLA-типирования подразумевает использование уже готовых синтетических образцов, вступающих в реакцию с ДНК, а не с антигенами, что позволяет с точностью определить присутствие в пробе конкретных типов антигенов. Этот способ, помимо прочего, не нуждается в наличии живых лейкоцитов, с его помощью можно изучить любую клетку организма, а для исследования необходимо ничтожно маленькое количество крови. В некоторых случаях достаточно лишь соскоба, взятого со слизистой оболочки рта.
При использовании молекулярного способа HLA-типирования применяется метод ПЦР. Первый этап – это получение из цельной крови чистой геномной ДНК, тканей или лейкоцитарной суспензии. После этого в пробирке, с помощью коротких одноцепочных ДНК, специфичных по отношению к конкретному HLA –локусу, получают копию имеющегося образца ДНК. Эту операцию повторяют много раз, с целью получения количества ДНК фрагментов, достаточного для визуальной оценки. С этой целью реакционные смеси подвергают гибридизации или электролизу, а затем устанавливают наличие специфической амплификации.
Молекулярно-генетическое HLA-типирование считается более точным, чем серологическое. Обусловлено это наличием стандартизированных образцов. Помимо этого, молекулярное HLA-типирование предоставляет большее количество важной информации, касающейся новых аллелей ДНК, а также обеспечивает более качественную детализацию за счёт идентификации и антигенов, и самих аллелей. Последние, в свою очередь, определяют наличие на клетке конкретного типа антигена.
Если совпадений было много, то зачатие не наступит без соответствующей иммунотерапии. Курс лечения проводят до начала протокола экстракорпорального оплодотворения, и занимает он обычно 2-3 месяца. Пациентке назначают препараты иммуноглобулинов, например, Интраглобин, Октагам и другие. Ещё один курс лечения проводят и в начале беременности, это помогает максимально снизить риск возникновения реакции отторжения эмбриона.
Иммунные нарушения в организме супругов способствуют многочисленным неудачам при экстракорпоральном оплодотворении. К одной из самых распространённых категорий иммунных нарушений относится идентичность мужа и жены по системе HLA-антигенов. 
